Iklan
Pertanyaan
Solubilization of Integral Membrane Protein/IMP with high level of expression (SIMPLEx) adalah suatu teknologi yang dikembangkan untuk meningkatkan stabilitas IMP dan kelarutannya sehingga dapat diproduksi di sitosol. Hal ini dapat dilakukan dengan mendesain chimera dari IMP target yang difusi dengan protein MBP (maltose binding protein) dibagian N-terminalnya, dan ApoAI (Apolipoprotein A-I) dibagian C-terminalnya (Gambar A dan B). Sekelompok peneliti menggunakan teknik ini untuk menguji aktivitas dari IMP DsbB di E. coli , suatu protein yang normalnya berperan dalam membantu pembentukan ikatan disulfida dari protein target diperiplasma, ketika lokasi ekspresinya dipindahkan ke sitosol. Untuk itu, Simplex DsbB diekspresikan bersama-sama dengan export-defective variant dari enzim alkaline phosphatase (PhoA), dan ekspresi fungsional dari DsbB diukur dari aktivitas alkaline phosphatase di sitosol (Gambar C). Gambar. A) Desain protein fusifchimera dari SIMPLEx-IMP. B) ekspresi IMP dan varian chimeranya di berbagai fraksi pelarut seluler. S = solublefterlarut, D = detergen, I = inclusion bodies/insoluble. wt = wild type. C) aktivitas dan produksi PhoA di sitosol dan periplasma ketika dikoekspresikan dengan dan tanpa SIMPLExDsbB. P = periplasma, C = sitosolfsitoplasma Tentukan apakah pernyataan berikut benar (B) atau salah (S)! Ekspresi PhoA di sitosol tanpa kehadiran SIMPLEx-DsbB meningkatkan kehadiran fraksi protein dengan struktur non-fungsional/salah melipat yang kemudian didegradasi oleh Protease seluler.
Solubilization of Integral Membrane Protein/IMP with high level of expression (SIMPLEx) adalah suatu teknologi yang dikembangkan untuk meningkatkan stabilitas IMP dan kelarutannya sehingga dapat diproduksi di sitosol. Hal ini dapat dilakukan dengan mendesain chimera dari IMP target yang difusi dengan protein MBP (maltose binding protein) dibagian N-terminalnya, dan ApoAI (Apolipoprotein A-I) dibagian C-terminalnya (Gambar A dan B). Sekelompok peneliti menggunakan teknik ini untuk menguji aktivitas dari IMP DsbB di E. coli, suatu protein yang normalnya berperan dalam membantu pembentukan ikatan disulfida dari protein target diperiplasma, ketika lokasi ekspresinya dipindahkan ke sitosol. Untuk itu, Simplex DsbB diekspresikan bersama-sama dengan export-defective variant dari enzim alkaline phosphatase (PhoA), dan ekspresi fungsional dari DsbB diukur dari aktivitas alkaline phosphatase di sitosol (Gambar C).
Gambar. A) Desain protein fusifchimera dari SIMPLEx-IMP. B) ekspresi IMP dan varian chimeranya di berbagai fraksi pelarut seluler. S = solublefterlarut, D = detergen, I = inclusion bodies/insoluble. wt = wild type. C) aktivitas dan produksi PhoA di sitosol dan periplasma ketika dikoekspresikan dengan dan tanpa SIMPLExDsbB. P = periplasma, C = sitosolfsitoplasma
Tentukan apakah pernyataan berikut benar (B) atau salah (S)!
Ekspresi PhoA di sitosol tanpa kehadiran SIMPLEx-DsbB meningkatkan kehadiran fraksi protein dengan struktur non-fungsional/salah melipat yang kemudian didegradasi oleh Protease seluler.
Benar
Salah
Iklan
I. Rohmawati
Master Teacher
Mahasiswa/Alumni Universitas Gadjah Mada
Jawaban
pernyataan di atas BENAR.
Pembahasan
Teknik SIMPLEx sebelumnya telah terbukti secara umum berguna untuk melarutkan serangkaian IMP yang beragam secara struktural, sehingga mengarah pada akumulasi IMP yang larut dalam air yang tidak teragregasi pada titer tinggi (~5–10 mg/L kultur); IMP ini mempertahankan aktivitas biologisnya, misalnya, pengikatan ligan dalam kasus EmrE dan stimulasi aktivitas 17,20-liase dalam kasus sitokrom manusia b5 (cyt b5)16. Katalisis in vivo dengan enzim yang dilarutkan SIMPLex dalam konteks jalur multienzim membuka pintu ke beragam aplikasi in vivo yang melibatkan IMP terlarut. Jika dilakukan secara alami (tanpa simplex) maka Ekspresi PhoA di sitosol akan meningkatkan kehadiran fraksi protein dengan struktur non-fungsional yang kemudian akan didegradasi oleh lisosom menggunakan enzim Protease. Dengan demikian, pernyataan di atas BENAR.
Teknik SIMPLEx sebelumnya telah terbukti secara umum berguna untuk melarutkan serangkaian IMP yang beragam secara struktural, sehingga mengarah pada akumulasi IMP yang larut dalam air yang tidak teragregasi pada titer tinggi (~5–10 mg/L kultur); IMP ini mempertahankan aktivitas biologisnya, misalnya, pengikatan ligan dalam kasus EmrE dan stimulasi aktivitas 17,20-liase dalam kasus sitokrom manusia b5 (cyt b5)16. Katalisis in vivo dengan enzim yang dilarutkan SIMPLex dalam konteks jalur multienzim membuka pintu ke beragam aplikasi in vivo yang melibatkan IMP terlarut. Jika dilakukan secara alami (tanpa simplex) maka Ekspresi PhoA di sitosol akan meningkatkan kehadiran fraksi protein dengan struktur non-fungsional yang kemudian akan didegradasi oleh lisosom menggunakan enzim Protease.
Dengan demikian, pernyataan di atas BENAR.
Perdalam pemahamanmu bersama Master Teacher
di sesi Live Teaching, GRATIS!
1
0.0 (0 rating)
Iklan
Pertanyaan serupa
RUANGGURU HQ
Jl. Dr. Saharjo No.161, Manggarai Selatan, Tebet, Kota Jakarta Selatan, Daerah Khusus Ibukota Jakarta 12860
Coba GRATIS Aplikasi Roboguru
Coba GRATIS Aplikasi Ruangguru
Produk Ruangguru
Bantuan & Panduan
Hubungi Kami
Ikuti Kami
©2025 Ruangguru. All Rights Reserved PT. Ruang Raya Indonesia